Aspergillus section Nigri produtores de fumonisina B2 isolados de castanha-do-brasil. por Larissa de Souza Ferranti - Versão HTML

ATENÇÃO: Esta é apenas uma visualização em HTML e alguns elementos como links e números de página podem estar incorretos.
Faça o download do livro em PDF, ePub, Kindle para obter uma versão completa.

4

LARISSA DE SOUZA FERRANTI

Aspergillus section Nigri produtores de fumonisina B2

isolados de castanha-do-brasil

Dissertação apresentada ao Programa de Pós-

Graduação em Microbiologia do Instituto de Ciências

Biomédicas da Universidade de São Paulo, para a

obtenção do título de Mestre em Ciências.

Área de concentração: Microbiologia

Orientador: Prof. Dr. Benedito Corrêa

Versão original

São Paulo

2012

9

RESUMO

FERRANTI, L. F. Aspergillus section Nigri produtores de fumonisina B2

isolados de castanha-do-brasil. 2012. 84 f. Dissertação (Mestrado em

Microbiologia) – Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São

Paulo, 2012.

A castanha-do-brasil ( Bertholletia excelsa) é uma planta de grande importância

econômica na região da Amazônia e constitui um importante produto exportado pelo

Brasil. No entanto, os baixos níveis tecnológicos característicos de sua cadeia

produtiva considerada ainda extrativista e as condições inadequadas de manejo da

matéria prima, favorecem o aparecimento de contaminação por fungos produtores

de micotoxinas. O conhecimento da distribuição de fungos toxigênicos em alimentos

é importante porque dá parâmetros para controlar e prevenir a produção destas

micotoxinas. A fumonisina B2 (FB2) é uma micotoxina produzida por espécies de

Fusarium e Aspergillus section Nigri, e é motivo de preocupação para a saúde

humana e de animais. O objetivo do presente trabalho foi verificar o potencial

toxigênico quanto à produção de fumonisina B2 das cepas de Aspergillus section

Nigri isolados de castanha-do-brasil e verificar a contaminação desse alimento por

essa micotoxina. Foram analisadas 200 cepas, previamente identificadas

morfologicamente como Aspergillus section Nigri, isoladas de amostras de castanha-

do-brasil, pertencentes a coleção de fungos do laboratório de Microbiologia do

Centro de Ciência e Qualidade de Alimentos (CCQA), do Instituto de Tecnologia de

Alimentos (ITAL) em Campinas–SP. Para testar o potencial de produção de

fumonisina B2, os isolados foram inoculados em Czapek Yeast Extract Agar

Sacarose 20% (CY20S). A toxina foi extraída com metanol e detectada por

cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) utilizando reagente

o-

phthaldialdehydo (OPA) para reação de derivatização. Um total de 100 amostras de

castanha-do-brasil provenientes dos Estados do Pará, Amazonas e São Paulo em

diferentes etapas da cadeia produtiva da castanha foram analisadas utilizando

coluna de imunoafinidade para extração e limpeza das amostras, OPA e CLAE, para

detecção e quantificação da fumonisina B2. De um total de 200 cepas de Aspergillus

section Nigri testadas quanto à capacidade de produção de fumonisina B2, apenas

39 cepas (19,5%) foram produtoras de FB2, as concentrações variaram de 0,01 a

37,25 µg/kg. Cento e trinta e oito (69%) não foram produtoras de fumonisina B2 e 23

cepas (11,5%) apresentaram picos menores que o limite de detecção. A atividade de

água destas 100 amostras de castanha-do-brasil variaram de 0,348 a 0,994 e a

infecção fúngica de 0 a 100%, nas diferentes etapas de cadeia. Embora várias

amostras apresentaram alta contaminação por Aspergillus section Nigri, nenhuma

amostra estava contaminada por fumonisina B2.

Palavras-chave: Aspergillus section Nigri. Fumonisina B2. Castanha-do-brasil.

10

ABSTRACT

FERRANTI, L. F. Aspergillus section Nigri produtores de fumonisina B2

isolados de castanha-do-brasil. 2012. 84 p. Masters thesis (Microbiology) –

Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2012.

The Brazil nut ( Bertholletia excelsa) is a plant with vast economic importance in the

Amazon region and is an important product exported by Brazil. However, low levels

of technology, and inadequate management of raw material favor the appearance of

contamination by fungi that produce toxic metabolites called mycotoxins. The

knowledge of the distribution of toxigenic fungi in foods is important because it

provides parameters to control and prevent the production of mycotoxins. Fumonisin

B2 (FB2) is a mycotoxin produced by Fusarium species and Aspergillus section Nigri,

and is a concern for human health. The aim of this study was to assess the toxigênic

potential for fumonisin B2 production by Aspergillus section Nigri strain isolated from

brazil nut and check the contamination of food by this mycoxotin. We analyzed 200

strains previously identified morphologically as Aspergillus section Nigri isolated from

brazil nut samples, preserved in silica gel at a temperature of 5 °C, from the fungi

collection at the Microbiology laboratory of the Centre for Science and Food Quality

(CCQA), Institute of Food Technology (ITAL), Campinas-SP. To test the potential of

fumonisin B2 production, the isolates were inoculated on Czapek Yeast Extract Agar

Sucrose 20% (CY20S). The toxin was extracted with methanol and identified by high

performance liquid chromatography (HPLC) using o-phthaldialdehydo reagent (OPA)

for derivatization reaction. A total of 100 brazil nut samples from the States of Pará,

Amazonas and São Paulo at different stages of the nut production chain were

analyzed using an immunoaffinity column for extraction and cleanup of samples,

HPLC and OPA for the detection and quantification of fumonisin B2. From a total of

200 strains of Aspergillus section Nigri tested for the ability to produce fumonisin B2,

only 39 strains (19.5%) were producing FB2 concentrations ranging from 0.01 to

37.25 g / kg, 138 (69%) were not producing fumonisin B2, and 23 strains (11.5%)

showed peaks less than the detection limit. The water activity of the 100 samples

from the brazil nuts ranged from 0.348 to 0.994 and a fungal infection of 0 to 100%,

at the different stages of the chain. Although several samples showed high

contamination by Aspergillus section Nigri, no sample was contaminated by

fumonisin B2.

Keywords: Aspergillus section Nigri. Fumonisin B2. Brazil nut.

15

1 INTRODUÇÃO

A castanha-do-brasil ( Bertholletia excelsa) é um produto de elevada

importância para a economia dos Estados da Amazônia Brasileira, sendo o principal

produto extrativo não madeireiro da floresta amazônica, está ligada à cultura das

populações tradicionais onde seus produtos e subprodutos são utilizados como fonte

de alimentação e renda há várias gerações. O Brasil abastece 75% do mercado

mundial e produz, anualmente, cerca de 26.000 toneladas de castanha-do-brasil,

sendo predominante a exportação do produto in natura. A amêndoa da castanha-do-

brasil é considerada um alimento rico em proteínas, lipídios e vitaminas, além de se

constituir em excelente fonte de selênio. Entretanto, o baixo nível tecnológico

característico de sua cadeia produtiva bem como as condições inadequadas de

manejo e manuseio da matéria-prima favorece a constituição de pontos de

contaminação com consequente risco à saúde do consumidor e perdas econômicas

comuns em todas as etapas (SOUZA, 2003).

Aspergillus section Nigri, conhecidos como black aspergilli, são comumente

encontrados em alimentos como uvas e produtos de uvas, café, cacau, grãos e

cebolas. É considerado um fungo frequente em castanhas, especialmente em

amendoim e nozes (PITT; HOCKING, 2009). A. niger é um dos mais importantes

fungos filamentosos utilizados em biotecnologia. Possui o grau GRAS ( Generally

Regarded as Safe) estabelecido pelo FDA ( US Food and Drugs Administration),

sendo utilizado para a produção de várias enzimas e ácidos orgânicos, em escala

industrial (SAMSON; VARGAS, 2009).

As micotoxinas são metabólitos secundários produzidas por fungos. Apesar

de haver um esforço para controlar contaminações fúngicas em alimentos, os fungos

toxigênicos estão presentes na natureza e ocorrem regularmente em alimentos

como cereais, frutas e castanhas. Os três principais gêneros produtores de toxinas

em alimentos são: Aspergillus, Fusarium e Penicillium (MURPHY et al., 2006).

Em 2007, Frisvad et al., relataram pela primeira vez a produção de fumonisina

B2 (FB2) por Aspergillus niger. Até então, a produção de fumonisina havia sido

relatada apenas em Fusarium verticillioides, F. proliferatum e outras espécies do

gênero Fusarium. Mais tarde, Frisvad et al. (2011), demonstram que A. niger pode

produzir tanto fumonisina B2 quanto B4 e B6, não encontrando cepas produtoras de

FB1 nem FB3.

16

A fumonisina B1 (FB1) é a mais estudada dentre este grupo de metabólitos,

mas quando comparada à FB2, esta última é mais citotóxica que a FB1 (GUTLEB;

MORRISON; MURK, 2002). Fumonisinas são carcinogênicas, hepatotóxicas e

nefrotóxicas. Causadoras de leucoencefalomalácia (relacionadas com lesões

necróticas no cérebro) em equinos e edema pulmonar em suínos. O consumo de

grãos contaminados por fumonisinas pode estar relacionado ao maior índice de

câncer esofágico em humanos (DESJARDINS, 2006; MURPHY et al., 2006).

Nestas condições são necessários estudos a fim de conhecer a incidência de

Aspergillus section Nigri produtores de fumonisina B2 nas castanhas-do-brasil, uma

vez que a incidência destas espécies neste produto é comum.

73

6 CONCLUSÃO

Através dos resultados obtidos a partir deste estudo, podemos concluir que a

infecção por Aspergillus section Nigri em castanha-do-brasil pode variar dependendo

da região, da etapa do processo, e das boas práticas realizadas.

Os valores de atividade de água das amostras de castanha-do-brasil

coletadas na floresta do Estado do Pará e do Amazonas foram mais elevados que

os valores encontrados nas processadoras e nos mercados.

As cepas de Aspergillus section Nigri mostraram potencialidade para

produção de fumonisina B2, Aspergillus awamori, apresentou uma maior produção

de FB2, comparado às com Aspergillus niger.

A presença de black aspergilli em alimentos é comum, exigindo um estudo

mais detalhado em relação à estas espécies em alimentos consumidos pela

população.

Através da análise molecular foi observado grande variabilidade genética

dentro da espécie de Aspergillus niger. Utilizando sequenciamento do gene β-

tubulina, foi concluído que as espécies Aspergillus awamori e Aspergillus niger, se

diferenciam por apenas uma base nitrogenada na posição 133 do gene, confirmando

que para a identificação destas espécies a utilização da biologia molecular junto a

análise morfológica é imprescindível.

Apesar das amostras de castanha-do-brasil apresentarem contaminação por

fungos produtores de fumonisina B2, nenhuma amostra estava contaminada com

essa micotoxina, assim pode-se concluir que a castanha-do-brasil não é um bom

substrato para a produção de FB2 por Aspergillus section Nigri.

74

REFERÊNCIAS*

ABARCA, M. L.; ACCENSI, F.; CANO, J.; CABAÑES, F. J. Taxonomy and

significance of black Aspergilli. Antonie van Leeuwenhoek, v. 86, p. 33-49, 2004.

ABRUNHOSA, L.; CALADO, T.; VENÂNCIO, A. Incidence of Fumonisin B2

Production by Aspergillus niger in Portuguese Wine Regions. J. Agric. Food Chem.,

v. 59, p. 7514-7518, 2011.

ALTSCHUL, S. F.; GISH, W.; MILLER, W.; MYERS, E. W.; LIPMAN, D. J. Basic local

alignment search tool. Journal of Molecular Biology, v. 215, p. 403-410, 1990.

AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA (ANVISA). Resolução RDC Nº7

de 18 de fevereiro de 2011. Diário Oficial da União. n. 37, seção 1, 22 de fevereiro

de 2011.

AOYAMA, K.; NAKAJIMA, M.; TABATA, S.; EIICHI, I.; TANAKA, T.; NORIZUKI, H.;

ITOH, Y.; FUJITA, K.; KAI, S.; TSUTSUMI, T.; TAKAHASHI, M.; TANAKA, H.;

IIZUKA, S.; OGISO, M.; MAEDA, M.; YAMAGUCHI, S.; SUGIYAMA, K. I.; SUGITA-

KONISHI, Y.; KUMAGAI, S. Four-year surveillance for ochratoxin A and fumonisins in

retail foods in Japan. Journal of Food Protection, v. 73, p. 344-352, 2010.

ARRUS, K.; BLANKA, G.; ABRAMSONB, D.; CLEARC, R.; HOLLEYA, R. A.

Aflatoxin production by Aspergillus flavus in Brazil nuts. J. Stor. Prod. Research , v.

41, p. 513-527, 2005.

ASHWORK, L. J.; SCHROEDER, H. W.; LANGLEY, B. C. Aflatoxins: Environmental

Factors Governing Occurrence in Spanish Peanuts. Science, v. 148, p. 1228-1229,

1965.

AZEVEDO, A. C. S.; FURLANETO, M. C.; SOSA-GOMEZ, D. R.; FUNGARO, M. H.

P. Molecular characterization of Paecilomyces fumosoroseus ( Deuteromycotina:

Hyphomycetes) isolates. Scientia Agricola, v. 57, p. 729-732, 2000.

BAKER, S. Aspergillus niger genomics: Past, present and into the future. Medical

Mycology, v. 44, p. S17-S21, 2006.

BARTÓK, T.; SZÉCSI, Á.; SZEKERES, A.; MESTERHÁZY, Á.; BARTÓK, M.

Detection of new fumonisin mycotoxins and fumonisin-like compounds by reversed-

phase highperformance liquid chromatography/electrospray ionization ion trap mass

spectrometry. Rapid Communications in Mass Spectrometry, v. 20, p. 2447-2462,

2006.

BARTÓK, T.; SZEKERES, A.; SZÉCSI, Á.; BARTÓK, M.; MESTERHÁZY, Á. A new

type of fumonisin series appeared on the scene of food and feed safety. Cereal

Research Communications, v. 36, p. 315-319, 2008. Suppl. B.

*De acordo com: ASSOCIAÇÃO BRASILEIRA DE NORMAS TÉCNICAS. NBR 6023: informação e

documentação: referências: elaboração. Rio de Janeiro, 2002.

75

BARTÓK, T.; TÖLGYESI, L.; SZEKERES, A.; VARGA, M.; BARTHA, R.; SZÉCSI, Á.;

BARTÓK, M.; MESTERHÁZY, Á. Detection and characterization of twenty-eight

isomers of fumonisin B1 (FB1) mycotoxin in a solid rice culture infected with Fusarium

verticillioides

by

reversed-phase

high-performance

liquid

chromatography/

electrospray ionization time-of-flight and ion trap mass spectrometry. Rapid

Communications in Mass Spectrometry, v. 24, p. 35-42, 2010.

BENNETT, J. W.; KLICH, M. Mycotoxins. Clinical Microbiology Reviews, v. 16, n.

3, 497-516, 2003.

BEUCHAT, L. R.; RICE, S. L. Byssochlamys spp. and their importance in processed

fruits. Adv. Food Res., v. 25, p. 237-288, 1979.

BIGELIS. R. Food enzymes. In: FINKELSTEIN, D. B.; BALL, C. (Ed.).

Biotechnology of filamentous fungi: technology and products. Boston, MS:

Butterworth-Heinemann, 1992. p. 361-415.

BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Projeto de

Monitoramento da castanha-do-brasil: relatório de atividades. Brasília, 2002. 110

p.

BAQUIÃO, A. C.; ZORZETE, P.; REIS, T. A.; ASSUNÇÃO, E.; VERGUEIRO, S.;

CORREA, B. Mycoflora and mycotoxins in field samples of Brazil nuts. Food

Control, v. 28, p. 224-229, 2012.

BRIDGE, P. D.; ARORA, D. K.; REDDY, C. A.; ELANDER, R. P. Application of PCR

in mycology. London, UK: CAB International, 1998. 368 p.

BUTCHKO, R. A.; PLATTNER, R. D.; PROCTOR, R. H. Deletion analysis of FUM

genes involved in tricarballylic ester formation during fumonisin biosynthesis, Journal

of Agricultural and Food Chemistry, v. 54, n. 25, p. 9398-9404, 2006.

CABAÑES, F. J.; ACCENSI, F.; BRAGULAT, M. R.; ABARCA, M. L.; CASTELLA, G.;

MINGUEZ, S.; PONS, A. What is the source of ochratoxin A in wine?. International

Journal of Food Microbiology, v. 79, p. 213-215, 2002.

CALDAS, E. D.; SILVA, S. C.; OLIVEIRA, J. N. Aflatoxinas e ocratoxinas A em

alimentos e riscos para a saúde humana. Revista Saúde Pública, v. 36, n. 3, p.

319-323, 2002.

CALDERARI, T. O. Biodiversidade de fungos aflatoxigênicos e aflatoxinas em

castanha-do-brasil. 2011. 145 f. Dissertação (Mestrado em Tecnologia de

Alimentos) - Universidade Estadual de Campinas, Campinas, 2011.

CAMPO/PAS, Manual de segurança e qualidade para a cultura da castanha-do-

brasil . Brasília, DF: Campo PAS, 2004. (Série Qualidade e Segurança dos

Alimentos).

CARLILE, M. J.; WATKINSON, S. C.; GOODAY, G. W. The fungi. 2nd ed. London,

UK: Academic Press, 2001. 588 p.

76

COUNCIL FOR AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY (CAST).

Mycotoxins: risks in plant, animal, and human systems. Raleigh, US: Task Force

Report, 2003. 109 p.

CAWOOD, M. E.; GELDERBLOM, W. C. A.; VLEGGAAR, R.; BEHREND, Y.; THIEL,

P. G.; MARASAS, W. F. O. Isolation of the fumonisin mycotoxins: A quantitative

approach. J. Agric. Food Chem. , v. 39, p. 1958-1962, 1991.

CHELKOWSKI, J. Cereal grain: mycotoxins, fungi and quality in drying and storage.

Amsterdam: Elsevier, 1991. 607 p.

CLIVER,  D. O. ; RIEMANN, H. Foodborne diseases. 2nd ed. Amsterdam: Academic Press, 2002. 424 p.

CHULZE, S. N. Strategies to reduce mycotoxin levels in maize during storage: a

review. Food Additives and Contaminants, v. 27, pt. A, p. 651-657, 2010.

COMPANHIA NACIONAL DE ABASTECIMENTO (CONAB). Conjuntura Mensal .

abr. 2012. Disponível em: <www.conab.gov.br>. Acesso em: 7 jun. 2012.

COOPERATIVA CENTRAL DE COMERCIALIZAÇÃO EXTRATIVISTA DO ESTADO

DO ACRE (COOPERACRE). Ficha técnica de produtos: castanha-do-brasil .

Disponível em: <www.cooperacre.gov.br>. Acesso em: 20 jul. 2012.

CROUS, P. W.; VERKLEY, G. J. M.; GROENEWALD, J. Z.; SAMSON, R. A. Fungal

Biodiversity. Uthrech, NL: CBS Fungal Biodiversity Center, 2009. 269 p. (CBS

Laboratory Manual Series, 1).

CREPPY, E. E. Human ochratoxicosis. J. Toxicol. Toxin Reviews, v. 18, p. 277-

293, 1999.

CRISHOLM, A.; MC AULEY, K.; MANN, J.; WILLIAMS, S.; SKEAFF, M. Cholesterol

lowering effects of nuts compared with a Canola oil enriched cereal of similar fat

composition. Nutrition, Metabolism & Cardiovascular Diseases, v. 15, n. 4, p.

284-292, 2005.

DESJARDINS, A. E. Fusarium mycotoxins: chemistry, genetics and biology.

Minnesota: APS Press, 2006. 260 p.

DUPUY, J.; LE BARS, P.; BOUDRA, H.; LE BARS, J. Thermostability of fumonisin

B1, a mycotoxin from Fusarium moniliforme, in corn. Applied and Env.

Microbiology, v. 59, n. 9, p. 2864-2867, 1993.

EMPRESA BRASILEIRA DE PESQUISA AGROPECUÁRIA (EMBRAPA). Pesquisas

tentam livrar castanha-do-brasil da contaminação por fungos. Disponível em:

<http://www.embrapa.br/>. Acesso em: 10 jun. 2012.

ENRÍQUEZ, G. Amazônia- Rede de Inovação de Dermocosméticos: Sub-rede de

dermocosméticos na Amazônia a partir do uso sustentável de sua biodiversidade

77

com enfoques para as cadeias produtivas da castanha-do-pará e dos óleos de

andiroba e copaíba. Parceria Estratégica, v. 14, n. 28, p. 51-118, 2009.

EURACHEM GUIDES. The fitness for purpose of analytical methods: a

laboratory guide to method validation and related topics. Teddington: LGC, 1998.

EUROPEAN UNION (EU). Commission Decision of 4 July 2003, imposing special

conditions on the import of Brazil nuts in shell originating in or consigned from Brazil

(2003/493/EC) L 163. Official Journal of the European Union, v. 46, p. 33-38

2003.

EUROPEAN UNION (EU). Comission regulation No 165/2010 of 16 February 2010.

Amending regulation (EC) N. 1881/2006. Setting maximum levels for certain

contaminants in foodstuff as regards aflatoxins. Official Journal of the European

Union, v. 53, p. 1-18, 2010.

FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS (FAO).

International trade in non-wood forest products: an overview . Disponível em:

<www.fao.org>. Acesso em: 7 jun. 2012.

FERRACIN, L. M.; FRISVAD, J. C.; TANIWAKI, M. H.; IAMANAKA, B. T.; SARTORI,

D.; SCHAPOVALOFF, M. E.; FUNGARO, M. H. P. Genetic Relationships among

Strains of the Aspergillus niger Aggregate. Braz. Arch. Biol. Technol., v. 52, n.

special, p. 241-248, 2009.

FINK-GREMMELS, J. H. Micotoxins: Their implications for human and animal health .

Veterinary Quarterly, v. 21, n. 4, p. 115-120, 1999.

FREIRE, F. C. O.; KOZAKIEWICZ, Z.; PATERSON, R. M. Mycoflora and mycotoxins

in Brazilian black pepper, white pepper and Brazil nuts. Mycopathologia, v. 149, n.

1, p. 13-19, 2000.

FRISVAD, J. C.; SAMSON, R. A. Filamentous fungi in foods and feeds: ecology,

spoilage and mycotoxin production. In: ARORA, D. K.; MUKERJI, K. G.; MARTH, E.

H. (Ed.), Handbook of applied mycology: volume 3. New York: Marcel Dekker,

1991. p. 31-68.

FRISVAD,  J. C. ; LARSEN,  T. O. ; DE VRIES, R.; MEIJER,  M.; HOUBRAKEN,  J.;

CABAÑES,  F. J.; EHRLICH,  K.; SAMSON,  R. A. Secondary metabolite profiling, growth profiles and other tools for species recognition and important Aspergillus

mycotoxins. Studies in Mycology, v. 59, p. 31-37, 2007a.

FRISVAD, J. C.; SMEDSGAARD, J.; SAMSON, R. A.; LARSEN, T. O.; THRANE, U.

Fumonisin B2 production by Aspergillus niger. Journal of Agricultural and Food

Chemistry, v . 55, p. 9727-9732, 2007b.

FRISVAD, J. C.; LARSEN, T. O. ; THRANE, U.; MEIJER, M.; VARGA, J.; SAMSON, R. A.; NIELSEN, K. Fumonisin and Ochratoxin production in industrial Aspergillus

niger strains. Plos One, v. 6, n. 8, p. 1-5, 2011.

78

FUNGARO, M. H. P. PCR na micologia: biotecnologia. Ciência e Desenvolvimento,

v. 17, p. 12-16, 2000.

FUNGARO, M. H. P.; VIEIRA, M. L. C. Marcadores moleculares. In: SERAFINI, I.;

BARROS, N. M.; AZEVEDO, J. L. (Ed.). Biotecnologia na agricultura e na

agroindústria. Guaíba, PR: Agropecuária, 2001. p.153-199.

FUNGARO, M. H. P.; VISSOTTO, P. C.; SARTORI, D.; VILAS-BOAS, L. A.;

FURLANETO, M. C.; TANIWAKI, M. H. A molecular method for detection of

Aspergillus carbonarius in coffee beans. Current Microbiology, v. 49, n. 2, p. 123-127, 2004.

GAZZOTTI, T.; LUGOBONI, B.; ZIRONI, E.; BARBAROSSA, A.; SERRAINO, A.;

PAGLIUCA, G. Determination of fumonisin B1 in bovine milk by LC-MS/MS. Food

Control, v. 20, p. 1171-1174, 2009.

GELDERBLOM, W. C.; JASKIEWICZ, K.; MARASAS, W. F.; THIEL, P. G.; HORAK,

R. M.; VLEGGAAR, R.; KRIEK, N. P. Fumonisins-Novel Mycotoxins with Cancer-

Promoting Activity Produced by Fusarium moniliforme . Applied and Environmental

Microbiology , v. 54, n. 7, p. 1806-1811, 1988.

GLASS, N. L.; DONALDSON, G. C. Development of primer sets designed for use

with the PCR to amplify conserved genes from filamentous ascomycetes. Appl.

Environ. Microbiol. , v. 61, p. 1323-1330, 1995.

GOMPERTZ, O. F.; GAMBALE, W.; PAULA, C. R.; CORRÊA, B. Características

gerais dos fungos. In: TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM, F. (Ed.). Microbiologia. 5.

ed. São Paulo: Atheneu, 2008. p. 479-491.

GONÇALVES, J. S.; FERRACIN, L. M.; VIEIRA, M. L. C.; IAMANAKA, B. T.;

TANIWAKI, M. H.; FUNGARO, M. H. P. Molecular analysis of Aspergillus section

Flavi isolated from Brazil nuts. World J. Microbiol. Biotechnol., v. 28, p. 1817-1825,

2012.

GUTLEB, A. C.; MORRISON, E.; MURK, A. J. Cytotoxicity assays for mycotoxins

produced by Fusarium strains: a review. Environ. Toxicol. Pharmacol., v. 11, p.

309-320, 2002.

HANSEN, C. C. The characterization of fumonisin B6 biosynthesis in

Aspergillus niger. 2010. 79 p. Masters thesis - Center for Microbial Biotechnogy

Departament of Systems of Biology Technical University of Denmark, Denmark,

2010.

HEDAYATI, M. T.; PASQUALOTTO, A. C.; WARN, P. A.; BOWYER, P.; DENNING,

D. W. Aspergillus flavus: human pathogen, allergen and mycotoxin producer.

Microbiology, v. 153, p. 1677-1692, 2007.

HOMMA, A. K. O.; CARVALHO, R. A.; FERREIRA, C. A. P.; NASCIMENTO JR, J. D.

B. A destruição de recursos naturais: o caso da Castanha-do-Brasil do Pará no

79

sudeste paranaense . Belém: Embrapa Amazônia Oriental, 2000. 74 p. (Documentos,

32).

HUSSEIN, S. H.; BRASELL, J. M. Toxicity, metabolism, and impact of mycotoxins on

humans and animals. Toxicology, v. 167, n. 2, p. 101-134, 2001.

INTERNATIONAL AGENCY FOR RESEARCH ON CANCER (IARC). Some naturally

occurring substances: Food items and constituents, heterocyclic aromatic amines

and mycotoxins. In: _______. Monographs on the evaluation of the carcinogenic

risks to humans. Lyon, France, 1993. v. 56, p. 571.

INTERNATIONAL AGENCY FOR RESEARCH ON CANCER (IARC). Some

traditional herbal medicines, some mycotoxins, naphthalene a stryrene. In:

________. Monographs on the evaluationof carcinogenic risks to humans.

Lyon, France, 2002. v. 82, p. 171-300.

JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITIVES (JECFA).

Evaluation of 56 certain Mycotoxins in food. Geneva: World Health Organization.

2002. (WHO Technical Report Series, 906).

KELLER, N. P.; HOHN, T. M. Metabolic pathway gene clusters in filamentous fungi,

Fungal Genetics and Biology , v. 21, n. 1, p. 17-29, 1997.

KELLER, N. P.; TURNER, G.; BENNETTI, J. W. Fungal secondary metabolism -

Biochemistry to genomics. Nature Publishing Group – Nature Reviews, v. 3, p.

937-947, 2005.

KLICH, M. A.; PITT, J. I. Differentiation of Aspergillus flavus from Aspergillus

parasiticus and other closely related species. Transactions of the British Mycology

Society, v. 91, p. 99-108, 1988.

KLICH, M. A.; MENDOZA, C.; MULLANEY, E.; KELLER, N. P.; BENNETT, J. W. A

new sterigmatocystin–producing Emericella variant from agricultural desert soils.

Systematic and Applied Microbiology, v. 24, p. 131-138, 2001.

KUSHIRO, M.; ZHENG, Y.; NAGATA, R.; NAKAGAWA, H.; NAGASHIMA, H. Limited

surveillance of fumonisins in brown rice and wheat harvested in Japan. Journal of

Food Protection, v. 72, p. 1327-1331, 2009.

LIESENER, K.; CURTUI, V.; DIETRICH, R.; MÄRTLBAUER, E.; USLEBER, E.

Mycotoxins in horse feed. Mycotoxin Research, v. 26, p. 23-30, 2010.

LOGRIECO, A.; FERRACANE, R.; HAIDUKOWSKY, M.; COZZI, G.; VISCONTI, A.;

RITIENI, A. Fumonisin B2 production by Aspergillus niger from grapes and natural

occurrence in must. Food Additives and Contaminants, v. 26, pt. A, p. 1495-1500,

2009.

LOPES, M. S.; LOPES, M. T. G.; FIGUEIRA, A.; CAMARGO, L. E. A.; FUNGARO,

M. H. P.; CARNEIRO, M. S.; VIEIRA, M. L. C. Marcadores moleculares dominantes

80

(RAPD e AFLP). Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento, Uberlândia, v. 5, n.

29, p. 56-60, 2002.

MANJULA, K.; HELL, K.; FANDOHAN, P.; ABASS, A.; BANDYOPADHYAY, R.

Aflatoxin and fumonisin contamination of cassava products and maize grain from

markets in Tanzania and Republic of the Congo. Toxin Reviews, v. 28, p. 63-69,

2009.

MANOVA, R.; MLADENOVA, R. Incidence of zearalenone and fumonisins in

Bulgarian cereal production. Food Control, v. 20, p. 362-365, 2009.

M NSSON, M.; KLEJNSTRUP, M. L.; PHIPPS, R. K.; NIELSEN, K. F.; FRISVAD, J.

C.; GOTFREDSEN, C. H.; LARSEN, T. O. Isolation and characterization of fumonisin

B6, a new fumonisin from Aspergillus niger. J. Agric. Food Chem., v. 58, p. 949-953,

2010.

MARASAS, W. F. O.; KELLERMAN, T. S.; GELDERBLOM, W. C. A.; COETZER, J.

A. W.; THIEL, P. G.; VAN DER LUGT, J. J. Leukoencephalomalacia in a horse

induced by fumonisin B1 isolated from Fusarium moniliforme. Onderstepoort J. Vet.

Res., v. 55, p. 197-203, 1988.

MARASAS, W. F. Discovery and occurrence of the fumonisins: a historical

perspective. Environ. Health Perspect. , v. 109, p. 239-243, 2001. Suppl. 2.

MARIN, S.; MAGAN, N.; RAMOS, A. J.; SANCHIS, V. Fumonisin-Producing Strains

of Fusarium: a review of their ecophysiology. Journal of Food Protection, v. 67, n.

8, p. 1792-1805, 2004.

MENEZES, M.; PINHEIRO, M. R.; GUAZZELLI, A. C.; MARTINS, F. Cadeia

produtiva da castanha do Brasil no estado do Amazonas. Série técnica meio

ambiente e desenvolvimento sustentável, Manaus, v. 3, p. 1-21, 2005.

MERRILL, A. E.; LIOTTA, D. C.; RILEY, R. T. Fumonisins: naturally occurring

inhibitors of ceramide synthesis. Trends Cell Biol., v. 6, p. 218-223, 1996.

MOGENSEN, J. M.; LARSEN, T. O.; NIELSEN, K. F. Widespread occurrence of the

mycotoxin fumonisin B2 in wine. J. Agric. Food Chem., v. 58, p. 4853-4857, 2010a.

MOGENSEN, J. M.; FRISVAD, J. C.; THRANE, U.; NIELSEN, K. F. Production of

Fumonisin B2 and B4 by Aspergillus niger on Grapes and Raisins. J. Agric. Food

Chem., v. 58, p. 954-958, 2010b.

MONBALIU, S.; VAN POUCKE, C.; DETAVERNIER, C.; DUMOULIN, F.; VAN DE

VELDE, M.; SCHOETERS, E.; VAN DYCK, S.; AVERKIEVA, O.; VAN PETEGHEM,

C.; DE SAEGER, S. Occurrence of mycotoxins in feeds as analyzed by a multi-

mycotoxin LC-MS/MS method. Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 58,

p. 66-71, 2010.

MONTVILLE, T. J.; MATTHEWS, K. R. Food microbiology: an introduction. 2nd ed.

Washington: ASM, 2008. 446 p.

81

MORETTI, A.; FERRACANE, L.; SOMMA, S.; RICCI, V.; MULÈ, G.; SUSCA, A.;

RITIENI, A.; LOGRIECO, A. F. Identification, mycotoxin risk and pathogenicity of

Fusarium species associated with fig endosepsis in Apulia, Italy. Food Additives

and Contaminants, v. 27, pt. A, p. 718-728, 2010.

MURPHY, P. A.; HENDRICH, S.; LANDGREN, S.; BRYANT, C. M. Food mycotoxin:

An update. Journal of food Science, v. 71, n. 5, p. 51-65, 2006.

NIELSEN, K. F.; MOGENSEN, J. M.; JOHANSEN, M.; LARSEN, T. O.; FRISVAD, J.

C. Review of secondary metabolites and mycotoxins from the Aspergillus niger

group. Analytical and bioanalytical chemistry, v. 395, n. 5, p. 1225-1242, 2009.

NOONIM, P.; MAHAKARNCHANAKUL, W.; NIELSEN, K. F.; FRISVAD, J. C.;

SAMSON, R. A. Fumonisin B2 production by Aspergillus niger in Thai coffee beans.

Food Additives and Contaminants, v. 26, n. 1, p. 94-100, 2009.

OLSEN, M.; JOHNSSON, P.; MÖLLER, T.; PALADINO, R.; LINDBLAD, M.

Aspergillus nomius an important aflatoxin producer in Brazil nuts?. World Mycotoxin

Journal, v. 1, n. 2, p. 123-126, 2008.

PEL, H. J. et al. Genome sequencing and analysis of the versatile cell factory

Aspergillus niger CBS 513.88. Nature Biotechnology, v. 25, n. 2, p. 221-231, 2007

PACHECO, A. M.; SCUSSEL, V. M. Castanha-do-brasil: da floresta tropical ao

consumidor. Florianópolis: Editograf, 2006. 176 p.

PACHECO, A. M.; SCUSSEL, V. M. Selenium and aflatoxin levels in raw Brazil nuts

from the Amazon basin. J. Agric. Food Chem . , v. 55, p. 11087-11092, 2007.

PAGANO, L.; CAIRA, M.; PICARDI, M.; CANDONI, A.; MELILLO, L.; FIANCHI, L.;

OFFIDANI, M.; NOSARI, A. Invasive Aspergillosis in patients with acute leukemia:

update on morbidity and mortality-SEIFEM-C Report. Clinical Infectious Diseases,

v. 44, p. 1524-1525, 2007.

PERAICA, M.; RADIC, B.; LUCIC, A.; PAVLOVIC, M. Toxic effects of mycotoxins in

humans. World Health Organ. , v. 77, p. 754-766, 1999.

PERRONE, G.; STEA, G.; EPIFANI, F.; VARGA, J.; FRISVAD, J. C.; SAMSON, R.

A. Aspergillus niger contains the cryptic phylogenetic species A. awamori. Fungal

Biology, v. 115, p. 1138-1150, 2011.

PITT, J. I.; HOCKING, A. D. Fungi and food spoilage. 3rd ed. New York: Springer.

2009, 471 p.

PONTECORVO, G.; ROPER, J. A.; HEMMONS, L. M.; MACDONALD, K. D.;

BUFTON, A. W. J. The genetics of Aspergillus nidulans. Advances in Genetics, v.

5, p. 141-148, 1953.

82

PREIS, R. A.; VARGAS, E. A. A method for determining fumonisin B1 in corn using

immunoaffinity column clean-up and thin layer chromatography/densitometry. Food

Addit. Contamin., v. 17, pt. A, p. 463-468, 2000.

PRUETT, S. T.; BUSHNEV, A.; HAGEDORN, K.; ADIGA, M.; HAYNES, C. A.;

SULLARDS, M. C.; LIOTTA, D. C.; MERRILL JR, A. H. Biodiversity of sphingoid

bases ("sphingosines") and related amino alcohols. Journal of lipid research , v. 49,

n. 8, p. 1621-1639, 2008.

REDE

DE

SEMENTES

DO

XINGU.

Disponível

em:

<http://www.sementesdoxingu.org.br/web/detalhesementes.php?id=74> Acesso em: 25 de jul. de 2012.

RHEEDER, J. P.; MARASAS, W. F. O.; VISMER, H. F. Production of fumonisin

analogs by Fusarium species. Applied and Environmental Microbiology, v. 68, p.

2101-2105, 2002.

RILEY, R. T.; ENONGENE, E.; VOSS, K. A.; NORRED, W. P.; MEREDITH, F. I.;

SHARMA, R. P.; SPITSBERGEN, J.; WILLIANS, D. E.; CARLSON, D. B.; MERRILL

JR., A. H. Sphingolipid perturbations as mechanisms for fumonisina carcinogenesis.

Environmental Health Perspectives, Research Triangle Park, v. 109, p. 301-308,

2001. Suppl. 2.

ROMERO-GONZALEZ, R.; VIDAL, J. L. M.; AGUILERA-LUIZ, M. M.; FRENICH, A.

G. Application of conventional solid-phase extraction for multimycotoxin analysis in

beers by ultrahigh-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry.

Journal of Agricultural and Food Chemistry, v. 57, p. 9385-9392, 2009.

ROTTINGHAUS, G. E.; COATNEY, C. E.; MINOR, H. C. A rapid, sensitive thin layer

chromatography procedure for the detection of fumonisin B1 and B2. J. Vet. Diagn.

Invest ., v. 4, p. 326-329, 1992.

SAMSON, R. A.; HOUBRAKEN, J. A. M. P.; KUIJPERS, A. F. A.; FRANK, J. M.;

FRISVAD, J. C. New ochratoxin or sclerotium producing species in Aspergillus

section Nigri. Studies in Mycology, v. 50, p. 45-61, 2004.

SAMSON, R. A.; NOONIM, P.; MEIJER, M.; HOUBRAKEN, J.; FRISVAD, J. C.;

VARGA, J. Diagnostic tools to identify black Aspergilli. Studies in Mycology, v. 59,

p. 129-145, 2007.

SAMSON, R. A.; VARGA, J. What is a species in Aspergillus?. Medical Mycology,

p. S1-S8, 2009.

SAMSON, R. A.; HOUBRAKEN, J.; FRISVAD, J. C.; THRANE, U.; ANDERSEN, B.

Food and Indoor fungi. Uthrech, NL: CBS Fungal Biodiversity Center, 2010. 390 p.

(CBS Laboratory Manual Series, 2).

SANGER, F.; NICKLEN, S.; COULSON, A. R. DNA sequencing with chain-

terminating inhibitors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the

United States of America, v. 74, n. 12, p. 5463-5467, 1977.

83

SANTOS, J. C.; SENA, A. L. C.; ROCHA, C. I. L. Competitividade brasileira no

comércio internacional de castanha do Brasil. In: CONGRESSO BRASILEIRO DA

SOCIEDADE DE ECONOMIA, ADMINISTRAÇÃO E SOCIOLOGIA RURAL

SOBER, 48., Campo Grande, MS, 2010. Anais… Campo Grande, MS: Sober, 2010.

14 p.

SHEPHARD, G. S. Determination of mycotoxins in human foods. Chem. Soc. Ver.,

v. 37, p. 2468-2477, 2008.

SMEDSGAARD, J. Micro-scale extraction procedure for standardized screening of

fungal metabolite production in cultures. J. Chromatog. , v. 760, pt. A, p. 264-270,

1997.

SIMÕES, A. V. Impactos de tecnologias alternativas e do manejo da Castanha-

do-Brasil ( Bertholletia excelsa, Humb. & Bonpl., 1808) no controle da

contaminação por aflatoxinas em sua cadeia produtiva. 2004. 62 f. Dissertação

(Mestrado em Ciências Agrárias) - Faculdade de Ciências Agrárias, Universidade

Federal do Amazonas, Manaus, 2004.

SOUZA, M. L. Processamento de cereais matinais extrusados de castanha-do-

Brasil com mandioca . 2003. 191 f. Tese (Doutorado em Tecnologia de Alimentos) -

Universidade Estadual de Campinas, Campinas, 2003.

STOCKMANN-JUVALA, H.; SAVOLAINEN, K. A review of the toxic effects and

mechanisms of action of fumonisin B1. Human & Experimental Toxicology , v. 27,

n. 11, p. 799-809, 2008.

SUN, S.; LEUNG, F.; TOMIC, J. Brazil nut ( Bertholletia excelsa H.B.K.) Proteins:

Fractionation, Composition and Identification of a sulfur-rich protein. J. Agric. Food

Chem., v. 35, p. 232-235, 1987.

TANIWAKI, M. H.; PITT, J. I.; IAMANAKA, B. T.; DANIELE SARTORI, D.; COPETTI,

M. V.; BALAJEE, A.; FUNGARO, M. H. P.; FRISVAD, J. C. Aspergillus bertholletius

sp. nov. from Brazil Nuts. Plos One, v. 7, n. 8, p. 1-7, 2012.

TIPPLES, K. H. Quality and nutritional changes in stored grain. In: JAYAS, D. S.;

WHITE, N. D. G.; MUIR, W. E. (Ed.). Stored Grain Ecosystems. New York: Marcel

Dekker, 1995. p. 325-351.

VARGA, J.; KEVEI, F.; HAMARI, Z.; TÓTH, B.; TÉREN, J.; CROFT, J. H.;

KOZAKIEWICZ, Z. Genotypic and phenotypic variability among black Aspergilli. In:

SAMSON, R. A.; PITT, J. I. (Ed.). Integration of modern taxonomic methods for

Penicillium and Aspergillus classification . Amsterdam: Harwood Academic

Publishers, 2000. p. 397-411.

VARGA, J.; KOCSUBÉ, S.; SURI, K.; SZIGETI, G.; SZEKERES, A.; VARGA, M.;

TÓTH, B.; BARTÓK, T. Fumonisin contamination and fumonisina producing black

Aspergilli in dried vine fruits of different origin. Int. J. Food Microbiol., v. 143, n. 3, p.

143-149, 2010.

84

VARGA, J.; FRISVAD, J. C.; KOCSUBÉ, S.; BRANKOVICS, B.; TÓTH, B.; SZIGETI,

G.; SAMSON, R. A. New and revisited species in Aspergillus section Nigri. Studies

in Mycology, v. 69, p. 1-17, 2011.

VISCONTI, A.; SOLFRIZZO, M.; DE GIROLAMO, A. Determination of fumonisins B1

and B2 in corn and corn flakes by liquid chromatography with immunoaffinity column

cleanup: Collaborative study. J. Offic. Assoc. Analyt. Chem. Internat. , v. 84, p.

1828-1838, 2001.

VOS,  P.;   HOGERS, R.;  BLEEKER, M. ; REIJANS, M.; VAN DE LEE, T.; HORNES,

M.;  ADRIE FRITERS, A.;  POT, J. ; PALEMAN, J.;   KUIPER, M.;  ZABEAU, M. AFLP: a new technique for DNA fingerprinting. Nucl. Acids Res. , v. 23, n. 21, p. 4407-4414, 1995.

WANG, E.; NORRED, W. P.; BACON, R. T.; RILEY, R. T.; MERRIL JR, A. H.

Inhibition of sphingolipid biosynthesis by fumonisins: implications for diseases

associated with Fusarium moniliforme. Journal of Biological Chemistry, v. 266, p.

14486-14490, 1991.

WAŚKIEWICZ, A.; IRZYKOWSKA, L.; BOCIANOWSKI, J.; KAROLEWSKI, Z.;

KOSTECKI, M.; WEBER, Z.; GOLIŃSKI, P. Occurrence of Fusarium fungi and

mycotoxins in marketable asparagus spears. Polish Journal of Environmental

Studies, v. 19, p. 219-225, 2010.

WU, F. Measuring the economic impacts of Fusarium toxins in animal feeds. Anim.

Feed Sci. Technol. , v. 137, p. 363–374, 2007.

WILLIAMS, J. G. K.; KUBELIK, A. R.; LIVAK, K. J.; RAFALSKI, J. A.; TINGEY, A. V.

DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers.

Nucleic Acids Research, v. 18, n. 22, p. 6531-6535, 1990.